多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個(gè)重大的突破。它的最大特點(diǎn)是不必純化中間產(chǎn)物，合成過(guò)程可以連續(xù)進(jìn)行，進(jìn)而為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動(dòng)多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過(guò)程如下：
 

　　基于Fmoc化學(xué)合成，先將所要合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性的高分子樹(shù)脂相連，然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點(diǎn)，同其它的氨基酸已經(jīng)活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重復(fù)這一過(guò)程，即可得到多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同，多肽后處理方式不同，純化方式也有差異。
 

　　那么關(guān)于多肽合成是的一些問(wèn)題，下面為大家總結(jié)了一些一起來(lái)看看吧。
 

　　1.做免疫用的多肽多長(zhǎng)為合適?
 

　　一般約10-15個(gè)氨基酸，當(dāng)然長(zhǎng)一些免疫效果好一些，不過(guò)合成費(fèi)用也會(huì)增加。MAP多肽則希望長(zhǎng)度在15aa以上，效果較好。另外，10aa以下的多肽免疫效果比較差。
 

　　2.免疫用多肽的純度需要很高嗎?
 

　　一般而言，免疫用Peptide，70-85%即可。
 

　　3.我們合成的多肽溶解性不好，多肽就有問(wèn)題對(duì)嗎?
 

　　很難準(zhǔn)確預(yù)測(cè)一個(gè)多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認(rèn)為多肽合成有問(wèn)題這個(gè)觀念并不正確。
 

　　4.多肽狀態(tài)是如何?如何保存儲(chǔ)存?
 

　　我們提供的多肽是粉末狀，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異，多肽一般長(zhǎng)期保存需要避光保存，并應(yīng)保存在-20度，短期可以保存在4度?？梢远虝r(shí)間的話是以室溫運(yùn)輸。
 

　　5.如何溶解多肽
 

　　溶解多肽是非常復(fù)雜的事情，一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點(diǎn)試驗(yàn)，在沒(méi)有確定合適的溶劑前千萬(wàn)不要合部溶解。 下列方法有助于您選擇合適的溶劑：
 

　　(1)判定多肽的電荷特定，設(shè)定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其它氨基酸的電荷為0。計(jì)算出將電荷數(shù)。
 

　　(2)如果凈電荷數(shù)>0，多肽為堿性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
 

　　(3)如果凈電荷數(shù)<0，多肽為酸性，用水溶解;如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
 

　　(4)如果凈電荷數(shù)=0，多肽為中性，一般需要用有機(jī)溶劑如乙腈，甲醇或異丙醇，DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來(lái)溶解疏水性很大的多肽。
 

　　6.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質(zhì)?
 

　　粗品和脫鹽級(jí)別的多肽中多肽和非多肽類雜質(zhì)：如非全長(zhǎng)多肽和多肽后處理的一些原料如DTT、TFA等。